簡(jiǎn)單(dān)介紹下細胞爬片的使用步驟

　　細胞爬片步驟

　　(1)儲(chǔ)存液：1:10稀釋液可以保存在4℃裏，三個(gè)月内仍然可以使用。稀釋、儲(chǔ)存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。

　　工作液：0.1%(w/v)PLL，用移液槍吸取0.3ml PLL＋3ml無菌去離子水，混勻放於(yú)10ml無菌塑料離心管中
。封口模密封後(hòu)4℃存放。

　　(2)無菌處理：PLL不可以高溫消毒，故應過濾除菌分裝於(yú)無菌處理的細胞凍存管内，1ml/管，封口模密封，4℃保存。另外，準備(bèi)無菌去離子水50ml。

　　細胞爬片方法與技巧

　　爬片的準備：

　　1、爬片可用一般的蓋(gài)玻片，也可用爬片；

　　2、應用蓋玻片，可根據自己的需要剪裁成合适的大小，以備(bèi)置於(yú)6孔闆、12孔闆或24孔闆；

　　3、将剪裁好的爬片，置於濃硫酸中浸泡並(bìng)過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍（個人認爲主要目的是沖洗幹淨就可以瞭(le)），放在飯盒或者培養皿（一定是玻璃的哦，要不然就„„）中烘幹後進行高壓消毒。

　　培養闆的準備：

　　1、泡酸過夜

　　2、沖(chōng)洗，烘幹(gàn)（1、2步驟與前大緻相同）

　　3、放入超淨工作台用紫外線照1～2小時就可以用瞭(le)（在照之前可以将爬片一並(bìng)放入，若細胞貼壁能力不強，可經多聚賴氨酸浸片後放入。貼壁能力強的話，就可以省略瞭(le)，進行紫外線消毒）

　　注：此步自己的經驗是爬片可以先浸入消毒後(hòu)的PBS内，緊接著(zhe)放入培養闆内。目的：

　　浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養闆孔底貼和緊密，以利於(yú)細胞長到爬片上。（自己剛開始做的時候，經常就是細胞全都長在瞭(le)爬片與培養闆之間，爬片上細胞罕見。）

　　細胞爬片：

　　1、胰酶消化細胞後(hòu)計(jì)數

　　2、根據(jù)自己的需要選擇合适的細(xì)胞密度種入培養闆内即可

　　3、第二天即可進(jìn)行幹(gàn)預措施