細胞爬片實驗的步驟說明

　　細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗步驟

　　天：

　　1.在培養(yǎng)闆中将已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

　　2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；

　　3.0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫(wēn)通透20min（細胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟）；

　　4.PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸幹(gàn)PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉(bì)30min；

　　5.吸水紙吸掉封閉(bì)液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗並(bìng)放入濕盒
，4℃孵育過夜；

　　第二天：

　　6.加熒光二抗：PBST浸洗爬片3次
，每次3min，吸水紙吸幹(gàn)爬片上多餘液體後(hòu)滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；

　　注意：從(cóng)加熒光二抗起，後面所有操作步驟都盡量在較暗處(chù)進行。

　　7.複(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對(duì)标本進行染核，PBST 5min×4次洗去多餘的DAPI；

　　8.用吸水紙吸幹(gàn)爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然後在熒光顯微鏡下觀察採(cǎi)集圖像。

　　細胞爬片抗原修複液是一種特别适合用於(yú)細胞爬片的快速抗原修複液，隻需室溫孵育5分鍾即可完成對(duì)細胞爬片樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定後的抗原修複。

　　使用說明：1，細胞爬片固定後用PBS洗滌3次，每次5min。2，加入抗原修複液使其覆蓋住細胞爬片，室溫孵育5min。3，PBS洗滌細胞爬片，重複3次，每次5min。充分洗滌殘(cán)留的SDS，以免造成抗體失去活性。4，封閉(bì)液封閉(bì)細胞爬片。5，随後即可進行一抗孵育等後續的免疫染色步驟。