幹(gàn)貨(huò)來襲 | 如何用細胞嵌入皿玩轉細胞遷移/侵襲實驗！

1.觀察細胞生長(zhǎng)狀态，取生長(zhǎng)狀态良好的細胞去掉培養基，加入無血清培養基饑餓處(chù)理24h。

2.将基質膠置於(yú)冰中並(bìng)在4℃過夜融化，将24孔細胞嵌入皿、移液管或槍頭放入4℃預冷過夜。

基質膠鋪膠準備

3.稀釋(shì)基質膠(jiāo)：在冰上，将基質膠(jiāo)用無血清培養基稀釋(shì)至1mg/mL，使用預冷的吸頭混合至均勻狀态。

4.均勻鋪膠：取60μL上述混合溶液垂直加入嵌入皿中，使其均勻平鋪在底部，注意均勻鋪膠，不要産生氣泡。
5.凝膠：随後置於37℃孵育2-4h聚合成薄膜，小心吸出未結合的基質膠。

6.基底膜水化：加入100μL無血清培養基，将培養闆置於(yú)37℃培養箱孵育30min，進(jìn)行水化。

細胞鋪闆

7.去除嵌入皿中液體，檢查是否有液體穿過(guò)上室進入到下室中，若沒有，則可用於(yú)接種細胞。

8.用無血清培養基配制樣本，建議将工作液濃(nóng)度設置成終濃(nóng)度的2倍。随後(hòu)按樣本：細胞懸液=1：1的比例加入到嵌入皿内
。

9.取500μL含10%FBS的完整培養基加入24孔闆下室，用鑷(niè)子将嵌入皿置於(yú)24孔闆内。

10.消化饑餓(è)後的細胞，用1mL無血清培養基重懸，進行細胞計數，根據上室細胞接種數量調(diào)整細胞密度。

11.先加入50μL的樣本工作液，再加入50μL的細胞懸液，此時(shí)樣本濃(nóng)度被稀釋2倍即爲終濃(nóng)度
。

12.将24孔闆置於37℃，5%CO₂，90%濕度條件下培養24-48h。

13.取出嵌入皿，去除培養(yǎng)液，在24孔闆幹(gàn)淨的孔中加入600uL 4%多聚甲醛固定液，将小室放入孔中室溫固定15-30分鍾，棄固定液，PBS洗滌(dí)小室内外2-3次。

14.在24孔闆幹(gàn)淨的孔中加入600uL結晶紫染色液，将小室放入孔中室溫染色8-10分鍾，棄染色液，PBS洗滌(dí)小室内外2-3次
。

15.适當(dāng)風(fēng)幹或用棉簽擦幹後，在顯微鏡下觀察。

16.用小鑷子小心揭下膜，底面朝上，适當(dāng)風(fēng)幹後，移至載玻片上用中性樹膠封片。在高倍顯微鏡下進行觀察和拍照，随機選取5個視野(上、下、中央、左、右各1個)計數呈紫色的細胞，統計結果。

注：“非貼壁”細胞計數，由於(yú)某些細胞自身的原因或某些膜的關系
，有時細胞在穿過膜後不能附著(zhe)在膜上，而是掉進下室。這種情況下可以收集下層培養液，用流式細胞儀計數細胞量，也可用細胞計數的方法直接在鏡下計數。

01

規格

02

膜材質

03

孔徑